Excel で qPCR データを分析する方法 (2 つの簡単な方法)

qPCR DNA の量を測定するために使用される高度な技術です PCR を使用してサンプルに . qPCR 定量的ポリメラーゼ連鎖反応という用語の略です .高度な手順ですが、分析できます qPCR エクセルでデータ。この記事では、2 のデモンストレーションを行います qPCR の分析方法 エクセルでデータ。それらについて知りたい場合は、練習用ワークブックをダウンロードしてフォローしてください。

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qPCR 解析とは

qPCR または 定量的ポリメラーゼ連鎖反応 DNA の量を測定するために使用される高度な技術です PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）を使用してサンプルに . qPCR データを分析するには 2 つの方法があります。

ダブル デルタ Ct 法

2001 年、リヴァク とシュミットゲン この分析手順を Double Delta Ct と呼びます 方法。 Pfafflの特殊なケースです 方法。この方法によると、2 を入力する必要があります。 実験データの平均セット (Gene Tested Experimental および ハウスキーピング遺伝子実験 ）およびコントロール データ（遺伝子検査済みコントロール） およびハウスキーピング遺伝子制御 ）。これらの値を使用して、ΔCTE の値を取得します と ΔCTC 、それぞれ。

ΔCTE の値 Gene Tested Experimental (TE) の控除値を表します および ハウスキーピング遺伝子実験 (HE) . ΔCTE の一般式 です:

同様に、ΔCTC の値 ハウスキーピング遺伝子制御 (HC) の控除値を表します 遺伝子検査済みコントロール (TC) から .この項の数式は次のとおりです:

その後、ΔΔCt の値を推定する必要があります。 . ΔΔCt の値を決定する式 です:

最後に、遺伝子発現率を評価します .この方法によると、プライマー効率を想定しています。 実験遺伝子と対照遺伝子の両方で 100% .したがって、遺伝子発現比の表現は です:

パフル法

パフル method は qPCR の一般的な方法です 分析。この方法は、Double Delta Ct と類似しています。 方法。ただし、プライマー効率 このメソッドの値は 100% ではありません .任意の数にすることができます。通常、この値は 90% の間です 110% まで 両方のハウスキーピング遺伝子 (HKG) および 興味の遺伝子 (GOI) . 2001 年、マイケル パフル 核酸研究でこの分析式を提供 ジャーナル。

このアプローチでは、2 セットのデータを入力する必要があります。このデータを使用して、それらの平均値を計算します。次に、対照サンプルの平均を推定します。これから、ΔCt の値を決定します . ΔCt の式 です:

さらに、遺伝子発現率を分析する数式 です:

Excel で qPCR データを分析する 2 つの簡単な方法

このコンテストでは、qPCR を分析します 3 のデータ または 5 データのサンプル。最初に Double Delta Ct の分析を行います メソッド、次に Pfaffl メソッドのデモンストレーションを行います .

1. Double Delta Ct 法による qPCR データの分析

qPCR の分析用 Double Delta Ct によるデータ メソッドでは、5 のデータセットを検討します DNA サンプル。この方法では、PCR プライマー効率の値を考慮する必要があります。 実験遺伝子と対照遺伝子の両方が 100% です .これは、Pfaffl メソッドの特定のケースであると主張することもできます。 手順は次のように分析されます:

📌 手順:

• まず、画像に示されているように、すべての遺伝子値を正確に入力します。 Gene Tested Experimental(TE)のすべての実験値を入力する必要があります および ハウスキーピング遺伝子実験 (HE) 列 B とC 同様に、Gene Tested Control(TC) のすべてのコントロール値を入力します。 および ハウスキーピング遺伝子制御 (HC) 列 D そしてE それぞれ。

• さて、セル F5 で 、ΔCTE の値を計算します 、次の式を書き留めてください。

=B6-C6

• Enter を押します .

• 同様に、ΔCTC の値を推定するには 、次の数式をセル G5 に書き留めます .

=D6-E6

• もう一度 Enter を押します .

• 次に、セル H5 を選択します 次の式を書き留めて、ΔΔCt の値を取得します .

=F6-G6

• Enter キーを押します .

• 最後に、遺伝子発現比の値を計算します または 2^(−ΔΔCt) 、次の式をセル I5 に書き留めます .

=2^(-H6)

• Enter を押します 最後に。

• その後、セルの範囲を選択 F6:I6 .

• ダブルクリック フィル ハンドル 数式を行 10 までコピーするアイコン .
• 遺伝子発現比率の値を取得します すべてのサンプルに対して。

したがって、私たちの方法は完璧に機能し、qPCR を分析できると言えます。

🔍 結果の解釈

遺伝子発現比率の値 0.6507 の セル I5 内 試験条件での遺伝子サンプルを意味します 制御条件に関して すべてが私たちのハウスキーピング遺伝子に正規化されています.さらに、パーセンテージで考えることができます。 0.6507 65.07% を意味します テスト済みでの遺伝子発現 制御条件で .

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2. Pfaffl メソッドを使用して qPCR を分析

このアプローチでは、Pfaffl メソッドを使用します。 .この方法と Double Delta Ct の主な違い メソッドは PCR プライマー効率 の値にあります 100% ではない実験遺伝子と対照遺伝子の両方 .この例では、プライマー効率を想定しています 両方の場合の値。 ハウスキーピング遺伝子について サンプル、プライマー効率の値を推測しています 93% です 、 興味のある遺伝子 の場合 この値は 101% になります。 この方法の手順は次のとおりです。

📌 手順:

• 最初に、画像に示すように、すべての遺伝子値を正確に入力します。 処理済みの 2 つのセットすべてを入力する必要があります。 とコントロール ハウスキーピング遺伝子 (HKG) の遺伝子値 および 興味の遺伝子 (GOI) .両方の遺伝子セットは Ct-1 と表示されます と Ct-2 それぞれ。

• まず、ハウスキーピング遺伝子 (HKG) のすべての計算を完了します。
• では、両方のセットの平均値をとります。そのために、AVERAGE 関数を使用します。 .
• 次の数式をセル E6 に書き留めます .

=AVERAGE(C6:D6)

• Enter を押します .

• 次に、ダブルクリック フィル ハンドル 数式をセル E11 までコピーするアイコン .

• その後、3 の平均を推定する必要があります 制御値。
• そのために、マージされた F6 に次の式を書き留めます

=AVERAGE(E9:E11)

• Enter キーを押します .

• 次に、セル G6 を選択します 次の式を書き留めて、ΔCt の値を取得します . 絶対セル参照を必ず入力してください セル F6 .

=E6-$F$6

• もう一度 Enter を押します .

• 次に、ダブルクリック フィル ハンドル 数式をセル G11 までコピーするアイコン .
• ハウスキーピング遺伝子 (HKG) に関するすべての計算 終了しました。

• 同様に、同じプロセスに従って、対象遺伝子（GOI）のすべての計算を完了します

• 最後にセルO6で 、次の式を書き留めて、発現比率の値を取得します。 絶対セル参照を確認してください セル N6 用 と H6 .

=($N$6^M6)/($H$6^G6)

• Enter を押します 最後に。

• さて、ダブルクリック フィル ハンドル 数式をセル O11 までコピーするアイコン .
• すべてのサンプルの発現率の値を取得します。

したがって、私たちの方法はうまく機能し、qPCR を分析できると言えます。

結論

これでこの記事は終わりです。この記事があなたのお役に立ち、qPCR を分析できるようになることを願っています エクセルでデータ。さらに質問や推奨事項がある場合は、下のコメント セクションでさらに質問や推奨事項を共有してください。

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